Naka lab

CiRA, Kyoto Univ.


Feeder-free iPSC culture [@220523]

2014年1月に発表したフィーダーフリー条件におけるヒトiPS細胞の樹立・維持培養に関するページです。(This is a page about the establishment and maintenance culture of human iPS cells in feeder-free conditions, which was announced in January 2014.)


  • コメント等ございましたらnakagawa-g*までご連絡ください(*を@に変えてください)。(If you have any comments or questions, please feel free to contact nakagawak-g * (Please change * to @).)
  • 通常はiMatrix-511をプレコートしてから使いますが、プレコートせず播種する際の培養液にY-27632とiMatrix-511を入れておくことで培養できることが再生研の末盛先生のところから報告されました。私のところでも試していますが、問題なく培養できています。170131_mn Nice paper has been published from Suemori-sensei’s lab. “Efficient Adhesion Culture of Human Pluripotent Stem Cells Using Laminin Fragments in an Uncoated Manner” (Scientific Reports, 2017, 7:41165 | DOI: 10.1038/srep41165) This method works well in my lab.


  • 継代翌日以降の培地交換の際に培地量を通常の倍に増やすと、3日に一度の培地交換でも細胞の形態・増殖にほとんど影響がないようです(例 培地量:3 mL/well of 6-well plate))。150915_mn (If you increase the medium after the next day from passage, you should change the medium for every two days. Passage=day0, medium change=day1, day4, day7…)


  • 単核球からのFf-iPSCの樹立に関して。Non-T細胞の培養条件では従来の7日間より5日間にしたほうが樹立効率が上がることが多かったです。141129_mn (For the establishment of Ff-iPSC, 5 days for the culture periods of PBMCs in non-T condition was better than 7 days culture.)


  • Nucleofector 4DによるElectroporationのプログラムはEO-100/EO-117のどちらも使用可能です。EO-117の方がpmaxGFPを使った導入効率の試験で成績が良かったです。140322_mn (Electroporation of the program with a Nucleofector 4D is available both of EO-100/EO-117. Performance was good in the test of transfer efficiency using pmaxGFP by EO-117.)


  • 0.5X TrypLE Selectの処理時間を4分に設定していますが、コロニーの状態によっては6分や8分の処理をすることがあります。効き具合を見て判断することが必要です。140320_mn (It is set to 4 minutes processing time of 0.5X TrypLE Select, but you may want to the processing of 8 minutes and 6 minutes depending on the state of the colony. It is necessary to determine by looking at the degree of effectiveness.)。[追記@220523] 最近の常法としては、0.5X TrypLE Selectを600 uL/well(6-well plate)入れてインキュベーターで10 min放置(途中で揺らす作業は不要)で行っています。The usual method these days is to add 0.5X TrypLE Select 600 uL/well (6-well plate) and leave it in an incubator for 10 min (no need to shake the plate during the incubation).